等度高效液相色谱仪是实验室中应用最为广泛的基础型分离分析仪器，其核心特征在于整个分析过程中流动相的组成比例、流速及洗脱强度保持恒定不变。与梯度洗脱不同，等度洗脱不随时间改变溶剂配比，因此特别适用于样品组分相对简单、保留时间差异不大或仅需进行常规定性定量分析的场合。该仪器通过高压泵将配制好的单一混合流动相以恒定流速输送至色谱柱，利用待测组分在固定相和流动相之间分配系数的微小差异，实现复杂混合物中各成分的高效分离。
等度高效液相色谱仪主要由高压输液系统、进样系统、分离系统（色谱柱）、检测系统及数据处理系统五大模块构成。其中，高压泵确保流动相在高压下稳定输出；自动进样器或手动进样阀将微量样品精准注入流路；色谱柱作为“心脏”，内部填充微米级固定相颗粒，提供巨大的比表面积以实现高分离效率；检测器（如紫外-可见光检测器UV-Vis、荧光检测器等）则对流出组分进行实时响应，将其转化为电信号记录。由于流动相组成固定，该方法操作简便、重现性好，且无需复杂的梯度混合装置，大大降低了运行成本和故障率。
一、开机前准备
提前将流动相完成0.45μm滤膜过滤，再进行超声波脱气15~20分钟，彻d除去管路中的气泡。
检查色谱柱安装方向与标识一致，确认管路连接无漏液，将泵头的吸液过滤头完q浸入流动相中。
确认仪器电源、数据工作站通讯链路正常，周边无强振动、强电磁干扰源。
二、开机与系统初始化
依次打开高效液相色谱仪主机、输液泵、检测器的电源开关，启动配套色谱工作站。
等待仪器自检完成，在工作站中完成仪器连接，确认设备状态显示为“就绪”。
旋开泵的排气阀，设置流速为5mL/min，点击自动排气功能，排气5分钟排尽管路残留气泡后，关闭排气阀。
三、参数设置与系统平衡
在工作站中设置等度模式下的固定流动相配比，将流速逐步提升至方法设定值（常规反相柱多为1.0mL/min）。
设置检测波长、柱温箱温度、系统最高保护压力等参数，保存为专属分析方法文件。
开启检测器灯源，待基线走平、压力数值稳定后，系统完成平衡，即可准备进样。
四、进样分析操作
将待测样品经0.22μm滤膜过滤后装入进样瓶，放入自动进样器样品盘对应位置。
在工作站中设置样品序列，录入样品名称、进样体积、数据保存路径等信息。
点击启动采集，仪器自动完成进样、数据采集，出峰完毕后自动停止采集，生成色谱图。
五、分析后冲洗与关机
若使用了含盐流动相，先用超纯水-甲醇混合溶液冲洗系统20~30分钟，彻d置换管路中的缓冲盐。
切换为纯甲醇冲洗色谱柱15~20分钟，待基线平稳后，将流速逐步降至0mL/min。
依次关闭检测器灯源、输液泵、仪器主机电源，退出工作站并关闭计算机，做好仪器使用登记。
