双酚A检测液相色谱法

  双酚A，也称BPA，是一种广泛应用于塑料制造的化学物质，主要用于生产聚碳酸酯（PC）、环氧树脂等多种高分子材料，被广泛用于生产化工产品和食品相关产品，如婴儿奶瓶、餐具、微波炉器皿、食品包装容器的涂层、饮料瓶以及供水管道等。研究显示，双酚A是一类具有雌激素样活性的内分泌干扰物，可能诱发儿童性早熟或致癌。

  自2011年3月1日起，欧盟成员国禁止使用含双酚A的塑料生产婴儿奶瓶，并从6月1日起禁止进口此类塑料婴儿奶瓶。针对双酚A安全性问题，现已将双酚A检测液相色谱法普遍应用。

双酚A检测液相色谱法实验准备：

试剂：甲醇：色谱纯

   乙酸、无水乙醇：分析纯

   水：超纯水（符合实验室一级用水）

   双酚A标准物质：纯度＞99.0%

仪器：LC-10Tvp液相色谱仪

   SPD-10Tvp紫外检测器

   手动进样阀

   电子天平

   超声波清洗器

   超纯水机

   恒温水浴锅

双酚A检测液相色谱法分析条件：

 色谱柱：C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)

 流动相：甲醇+水=75+25

 流速：0.7mL／min

 柱温：30℃

 检测波长：224nm

  进样量：20μl

 标准溶液的配置

  双酚A标准储备液：称取适量的双酚A标准物质，用甲醇稀释，配置成浓度为1000μg/ml的双酚A储备液。

  双酚A标准供试液：使用时用3%乙酸溶液稀释成浓度为1.0μg/ml的溶液. 

样品前处理

  称取5g的样品，将其剪成5×5mm的小碎片，置于250ml的三角烧瓶中，加入100mL的甲醇，50℃下超声提取2小时，过滤至250mL鸡心瓶，旋转蒸发至干，用5mL水漩涡洗脱，待净化。

样品浓缩和净化

E固相萃取小柱

活化、平衡：10 mL甲醇，10 mL水依次过柱；

上样：在水到达小柱上层筛板时，加入待净化液；

淋洗：6 mL水合10 mL 30%甲醇水溶液依次淋洗小柱，流出液弃去；

洗脱：6 mL 50%乙腈水溶液洗脱，收集洗脱液。

洗脱液50℃下氮气至近干，1mL流动相溶解，进样分析。

结果与讨论

   由参考文献可初步将流动相定为甲醇与超纯水，从实验结果可知：当只针对标准物质的测试时，使用纯甲醇做流动相对双酚A的响应效果，在检测样品含量时，我们可发现，以纯甲醇作为流动相将会产生大量的溶剂峰，影响到样品检测结果，因此我们适当的添加一定比例的水，降低流动相的洗脱能力，以避开溶剂峰的影响。由于3%的乙酸溶剂峰较大，因此将甲醇：水=75：25的流动相作为*流动相，其中可根据不同样品的性质我们也可灵活利用色谱条件。

   波长的选择: 经过二级阵列管检测器全波段扫描可知：双酚A在200nm至400nm波长范围内有三个zui大吸收峰，分别为200nm、224nm、280nm，由于考虑到流动相的影响，200nm在流动相甲醇的截至波长（210nm）内因此不予考虑，而双酚A在224nm处的响应度比在280nm处的响应度高，因此将*波长选定为224nm。

阴性和系统适用性试验

  不加入样品，加入试剂，按样品处理方法进行测定，在组分相应保留时间处没有吸收；适当的更改色谱条件中的流速、流动相比例、色谱柱品牌检测，均能符合相应的参数条件；其中取标样10μl进样检测，双酚A的理论板数大于7000。

 精密度和重现性实验

  取双酚A标准供试液，进样6针，每次10ul，进行测定，考察该组分精密度及重现性的相对标准偏差，精密度相对标准偏差为0.49%，重现性相对标准偏差为0.095%。

线性关系和检测限

  在本方法确定的色谱条件下，双酚A浓度为0.1008ug/ml-1008.2ug/ml范围内，线性关系良好，其峰面积-浓度的线性方程为：y = 10.537x+14.293，相关系数R2=0.9999；在 S/N =3的条件下，本方法zui低检测限为0.038mg/kg。

 回收率试验

  采用在实际样品中加入不同添加水平的双酚A标准溶液的方式进行回收率实验，按前处理方法处理后分析，采用外标法定量，每个添加水平单独测3次，实验结果表明，其平均回收率为85.78%～98.12%，RSD为397％～6.63％。