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技术支持

色谱法的有关知识
发布时间:2016-08-22   点击次数:1022次

       色谱法是生命科学、材料科学、环境科学等科学领域的重要分析手段,在药物分析中有着极为重要的地位,各国药典都收载了许多药物的色谱分析方法。《中华人民共和国药典》2015年版也不例外:收载了上千个药品用色谱法进行纯度检查、定性鉴别或含量测定。

      色谱柱中固定不变的物质是固定相,携带样品向前流动的是流动相,色谱类型较多,从不同角度可以有不同的分类方法:

 色谱法分类:

1、按流动相和固定相所处状态分类:

     流动相为气体的称为气相色谱,流动相为液体的称为液相色谱。固定相为固体的可分为气固色谱(GSC)或液固色谱(LSC),固定相为液体的有气液色谱(GLC)或液液色谱(LLC)。

 2、按固定相的形态分类:可分为柱色谱法、平面色谱法,如,纸色谱法、薄层色谱法等。

 3、按分离过程的机制分类:可分为分配色谱法、吸附色谱法、离子交换色谱法和空间排阻色谱法等类型,后两者只存在于 液相色谱中。

       另外,还有其他分离机制的色谱方法,如,毛细管电泳法,根据组分的电泳速度差异而实现分离。

 

色谱流出曲线与有关概念

 (一)色谱流出曲线和色谱峰:

 1、色谱流出曲线:在色谱分析中,样品流经色谱柱和检测器,所得到的信号-时间曲线,称为色谱流出曲线(elution profile),又称色谱图。

 2、基线:在操作条件下,没有组分流出、仅有流动相通过检测器系统时所形成的流出曲线。稳定的基线应是一条平行于横轴的直线。基线反映仪器(主要是检测器)的噪声随时间的变化。

 3、色谱峰:流出曲线上的突起部分,正常的色谱峰为正态分布曲线,曲线有zui高点,以此点的横坐标为中心,曲线对称的向两侧快速、单调下降。

       一种组分的色谱峰可用峰高或峰面积(用于定量)、峰位(用保留值表示,用于定性)及峰宽(用于衡量柱效)说明。

 

(二)保留值:

1、保留时间(retention time):色谱图横轴上从进样开始到某个组分的色谱峰顶点的时间间隔为该组分的保留时间。

 2、死时间:不被固定相保留的组分,从进样到出现峰极大值时的时间间隔。

 3、调整保留时间:组分被固定相滞留的时间。

 4、保留体积:从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大时,所需通过色谱柱的流动相体积,单位为mL。

 5、死体积:不被固定相保留的组分通过色谱柱所消耗的流动相的体积。

 6、调整保留体积:保留体积减死体积。

 7、相对保留值:两组分的调整保留值之比,也是色谱系统的选择性指标。

 

(三)色谱峰高和峰面积:

 1、峰高(peak height, h):色谱峰顶点至基线的距离。

 2、峰面积(peak area, A):色谱曲线与基线间包围的面积。

 

(四)色谱峰区域宽度:

 1、标准差:正态色谱流出曲线上两拐点间距离之半。

 2、半峰宽:峰高一半处的峰宽。

 3、峰宽:通过色谱峰两拐点作切线在基线上所截得的距离。

 

(五)分离度:又称分辨率或分辨度,它是色谱图中相邻两峰分离程度的量度。

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