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胆固醇的高效液相色谱HPLC检测方案

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胆固醇的高效液相色谱HPLC检测方案
胆固醇分子式C27H46O,分子量386.64。是动物甾醇中Z重要的一种。是脊椎动物细胞的重要组分。在脑和神经组织中含量特别多。血液中胆固醇含量多被认为与血管硬化和高血压有关,人体内的胆结石几乎全是胆固醇所构成。无色或微黄色晶体。熔点148℃。密度1.069g/cm3。在真空中可升华。微溶于水,难溶于冷乙醇,较易溶于热乙醇。溶于乙迷、苯、植物油中。

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胆固醇作用

  胆固醇广泛存在于动物体内,尤以脑及神经组织中丰富,在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。其溶解性与脂肪类似,不溶于水,易溶于乙迷等溶剂。胆固醇是动物组织细胞所不可缺少的重要物质,它不仅参与形成细胞膜,而且是合成胆汁酸,维生素D以及甾体激素的原料。胆固醇经代谢还能转化为胆汁酸、类固醇激素、7-脱氢胆固醇,并且7-脱氢胆固醇经紫外线照射就会转变为维生素D3,所以胆固醇并非是对人体有害的物质。胆固醇还是临床生化检查的一个重要指标,在正常情况下,机体在肝脏中合成和从食物中摄取的胆固醇,将转化为甾体激素或成为细胞膜的组分,并使血液中胆固醇的浓度保持恒定。当肝脏发生严重病变时,胆固醇浓度会降低。而在黄疸性梗阻和肾病综合征患者体内,胆固醇浓度往往会升高。

 

胆固醇的高效液相色谱样品处理过程

  精密称取胆固醇粉末0.05g(准确至0.1mg),用无水乙醇溶解定容至50mL备用;再用无水乙醇稀释至所需浓度。用0.45µm的有机系滤膜过滤,精密量取10µL,注入液相色谱仪,记录色谱图。

胆固醇的高效液相色谱HPLC检测方案色谱条件

色谱柱: C18反相色谱柱, 4.6 mm*250 mm,粒度5 µm

流动相:甲醇

波长:205nm

流速:1.0mL/min

进样量:10µL

柱温:38℃

胆固醇的高效液相色谱HPLC检测方案谱图

高效液相色谱仪器配置

高压输液泵    0.001-9.999ml/min    1台

紫外检测器    190-700NM         1台

手动进样阀    含触发开关         1套

阀安装支架                   1套

液相色谱柱    C18反相色谱柱       1支

微量进样器    100ul            1支

维护工具包    液相色谱专用启动工具  1套

色谱工作站    N2000或Clarify      1套

超声清洗仪                   1套

真空抽滤装置  带真空泵           1套

分析天平      感量0.1mg         1 台

    

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